分子診斷技術里,引物和探針是核心。引物是人工合成的寡核苷酸序列,作為核苷酸聚合起始的關鍵引導分子,其長度一般在18到27個堿基對,這與 Tm 值及特異性有關,太長(大于 38 個堿基對)會使延伸溫度超 74℃,超出 Taq DNA 聚合酶適宜反應溫度范圍,影響酶活性與 DNA 復制。
在PCR過程中,引物至關重要,是 DNA 聚合酶啟動復制提供起點。一個引物與靶區(qū)域一端的模板鏈互補配對,另一個與另一端互補結合,為聚合酶指明起始位置。PCR 啟動、溫度升高使 DNA 模板鏈解旋成單鏈后,引物依堿基互補配對原則與特定區(qū)域結合,DNA 聚合酶識別結合位點,從引物 3’端添加核苷酸,沿 5’到 3’端延伸新鏈,循環(huán)往復實現 DNA 片段指數級擴增,引物就像建高樓的基石,保障 PCR 高效推進。